體積、電導、激光散射法(VCS)
這是Beckman-Coulter公司生產的血細胞分析儀所采用的經典分析方法,它集三種物理學檢測技術于一體,在細胞處于自然原始的狀態(tài)下對其進行多參數(shù)分析。該方法也稱為體積、電導、激光散射血細胞分析法。此技術采用在標本中**先加入紅細胞溶血劑溶解掉紅細胞,然后加入穩(wěn)定劑來中和紅細胞溶解劑的作用,使白細胞表面、胞漿和細胞體積保持穩(wěn)定不變。然后應用鞘流技術將細胞推進到流動細胞計數(shù)池(Flowcell)中,接受儀器VCS三種技術的檢測。
V代表體積(Volume)測量法,是血液細胞分析儀檢測方法采用經典的庫爾特專利技術,用低頻電流準確分析細胞體積。體積是區(qū)分白細胞亞群的一個重要的參數(shù),它可有效區(qū)分體積大小差異顯著的淋巴細胞和單核細胞。
C代表高頻電導性(Conductivity),采用高頻電磁探針原理測量細胞內部結構間的差異,也是該公司的專利技術。細胞膜對高頻電流具有傳導性,當電流通過細胞時,細胞核的化學組份可使電流的傳導性產生變化,其變化量可以反映出細胞內含物的信息。該參數(shù)可用來區(qū)分體積相近而內部性質不同的細胞群體,如淋巴細胞和嗜堿性粒細胞,由于它們的細胞核特性不同而在傳導性參數(shù)上有所區(qū)別。
S代表激光散射(Scatter)測量技術,采用氦氖激光源發(fā)出的單色激光掃描每個細胞,收集細胞在10°~70°角度內出現(xiàn)的散射光 (MALS)信號。該激光束可穿透細胞,探測細胞內核分葉狀況和胞漿中的顆粒情況,提供有關細胞顆粒性的信息,可以區(qū)分出顆粒特性不同的細胞群體。例如細胞內顆粒粗的要比顆粒細的散射光更強,因此可以用于區(qū)分粒細胞中的嗜中性、嗜酸性和嗜堿性三種細胞。
電阻抗、射頻與細胞化學聯(lián)合檢測技術
典型機型如SysmexSE-9000/SE-9500/XE-2100等。這類儀器共有四個不同的檢測系統(tǒng),將標本用特殊細胞染色技術處理后再應用RF和DC技術對白細胞進行分類和計數(shù)。其共采用如下四個檢測系統(tǒng):
嗜酸性粒細胞檢測系統(tǒng):該系統(tǒng)是利用電阻抗方式計數(shù)。血液經分血器分血后部分與嗜酸性粒細胞計數(shù)溶血劑混合,特異的溶血劑使嗜酸性粒細胞以外的所有細胞均溶解或萎縮,這種含完整嗜酸性粒細胞的液體經阻抗電路計數(shù)。
嗜堿性粒細胞系統(tǒng):該系統(tǒng)檢測原理與嗜酸性粒細胞相同,不同的是其溶血劑只能保留血液中的嗜堿性粒細胞。
淋巴、單核、粒細胞(中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞)檢測系統(tǒng):該系統(tǒng)采用電阻抗與射頻聯(lián)合檢測方式,使用作用較溫和的溶血劑,對核及細胞型態(tài)影響不大。在內外電極上存在直流和高頻兩個發(fā)射器。由于直流電不能達到細胞質及核質,而射頻電能透入胞內測量核大小和顆粒多少,因此這兩種不同的脈沖信號的個數(shù)及高低綜合反映了細胞數(shù)量、大?。―C)和核及顆粒密度(RF)。由于淋巴細胞、單核細胞及粒細胞的大小、細胞質含量、核形態(tài)與密度均有較大差異,故可通過掃描得出其比例。
幼稚細胞檢測系統(tǒng):該系統(tǒng)也是利用電阻抗方式計數(shù)。其原理血液細胞分析儀檢測方法是由于幼稚細胞上的脂質較成熟細胞少,在細胞懸液中加入硫化氨基酸后,由于脂質占位不同,結合在幼稚細胞上的硫化氨基酸較成熟細胞多,且對溶血劑有抵抗作用,故能保持幼稚細胞的形態(tài)完整而溶解成熟細胞,即可通過阻抗法檢測。
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