1. 熒光激發(fā)與信號產(chǎn)生
微陣列芯片掃描儀的核心原理是利用熒光標記技術(shù)。在微陣列芯片上,生物分子(如DNA、RNA或蛋白質(zhì))通常被熒光染料標記。當掃描儀的激光照射到芯片表面時,熒光標記物吸收特定波長的激光能量,并發(fā)出熒光信號。
2. 光學系統(tǒng)與信號收集
掃描儀的光學系統(tǒng)負責將熒光信號收集并聚焦到探測器上。通常采用共聚焦光路設(shè)計,這種設(shè)計能夠有效提高信號的分辨率和靈敏度。具體過程如下:
激光光源:激光器發(fā)出特定波長的激光,經(jīng)過擴束和聚焦后照射到芯片表面。
熒光收集:熒光信號通過物鏡和濾光片系統(tǒng),去除雜散光后被聚焦到探測器上。
共聚焦技術(shù):通過針孔光柵控制聚焦深度,確保只有來自芯片表面的熒光信號被探測器捕獲,從而減少背景噪聲。
3. 信號檢測與轉(zhuǎn)換
熒光信號被探測器(如光電倍增管PMT)捕獲后,轉(zhuǎn)換為電信號。PMT能夠?qū)蝹€光量子轉(zhuǎn)換為多個電子,從而放大信號。隨后,電信號通過模數(shù)轉(zhuǎn)換器(A/D)轉(zhuǎn)換為數(shù)字信號,以便計算機處理。
4. 掃描與成像
掃描儀通過逐點或逐行掃描的方式,對微陣列芯片上的每個像素進行檢測。掃描過程可以通過以下方式實現(xiàn):
移動芯片:芯片裝載平臺在馬達驅(qū)動下水平移動。
移動光束:通過微反光鏡改變?nèi)肷浼す獾姆较颉?/p>
多色熒光檢測:掃描儀可以通過切換不同波長的激光和濾光片,分別檢測不同熒光標記的信號。
5. 數(shù)據(jù)分析
掃描完成后,計算機軟件對采集到的數(shù)字信號進行處理和分析。軟件功能包括:
圖像生成:將熒光信號轉(zhuǎn)換為圖像文件(如Tiff或BMP格式),并進行可視化。
數(shù)據(jù)分析:對熒光強度進行量化分析,提取生物分子的表達水平,并生成報告。
6. 技術(shù)優(yōu)勢
高靈敏度:能夠檢測到極低濃度的熒光信號。
高分辨率:通過共聚焦技術(shù)和高精度光學系統(tǒng),能夠分辨微小的生物分子點陣。
多色檢測:支持多種熒光標記物,可同時檢測多個生物分子。
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