**實(shí)驗(yàn)室中應(yīng)用的GHB測(cè)定方法主要分為兩類:
一是基于GHB與非GHB的電荷不同,如離子交換層析、電泳和等電聚集方法
二是基于血紅蛋白上糖化基團(tuán)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn),如親和層析和免疫實(shí)驗(yàn)
(1)親和層析法:該方法特異性強(qiáng), 糖化血紅蛋白分析儀檢測(cè)方法不受異常血畿蛋白的干擾。適合于**科室使用,尤其對(duì)小兒患者而言更有優(yōu)勢(shì)。其檢測(cè)結(jié)果也完全達(dá)到并超過(guò)**要求,CV值5%以內(nèi)。
(2)高壓液相方法(HPLC),可全自動(dòng)分離測(cè)定糖化血紅蛋白及血蛋白的變異體和亞型,但儀器的操作保養(yǎng)要求較高,CV值1%以內(nèi)。
(3)免疫凝集法:原理是糖化血紅蛋白與相應(yīng)的單抗結(jié)合進(jìn)而發(fā)生凝集反應(yīng),通過(guò)測(cè)定吸光度來(lái)表示凝集量,可用于全自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行測(cè)定。每次試驗(yàn)均應(yīng)使用一個(gè)新試劑盒,操作前應(yīng)注意混勻試劑。指出的是免疫凝集法測(cè)定糖化血紅蛋白,精密度較差,CV值一般不大小5%。
(4)離子捕獲法,其原理是糖化血紅蛋白與相應(yīng)抗體結(jié)合后, 糖化血紅蛋白分析儀檢測(cè)方法聯(lián)以熒光標(biāo)記物,而在IMX反應(yīng)孔中的玻璃纖維預(yù)先包被了高分子的四胺合物,使纖維表面帶正電,使前述的反應(yīng)復(fù)合物吸附在纖維表面,經(jīng)過(guò)一系列的清洗后測(cè)定其熒光強(qiáng)度,從而得到糖化血紅蛋白的濃度,該方法適用于成批糖化血紅蛋白標(biāo)本的檢測(cè)。
(5)電泳方法:毛細(xì)管電泳也能分離檢測(cè)糖化血紅蛋白和血紅蛋白質(zhì)的變異體,但尚無(wú)商品化,具有批量樣本通過(guò)能力的儀器面世,相當(dāng)程度地限制了該方法的**應(yīng)用。
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